猪殃殃药材质量控制方法研究(2)

Kromasil C18色谱柱（46 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈0.1%磷酸（二者体积比为13∶87），流速为1.0 mL/min，检测波长为 327 nm，柱温为25 ℃，进样量为20 μL。在上述色谱条件下，各成分分离度良好，结果见图3。
2.5.2对照品溶液的制备
取绿原酸对照品约10 mg，精密称定，置于25 mL的容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，制成每1 mL约含40 μg绿原酸的对照品溶液。
2.5.3供试品溶液的制备
将猪殃殃药材粉碎（过3号筛），精密称取约1 g粉末，加入60%（体积分数，下同）甲醇25 mL使之溶解，称重，浸泡30 min，超声处理（200 W，40 kHz）30 min，放冷。用60%甲醇补足损失的质量，摇匀，过滤，将续滤液作为供试品溶液。
2.5.4线性关系考察
选取80 μg/mL绿原酸对照品溶液作为储备液，分别精密吸取绿原酸储备液1，2，4，5，6，8 mL，加入甲醇定容至10 mL，摇匀。进样量为20 μL，测定峰面积，绘制关于绿原酸质量浓度与峰面积的标准曲线，得到线性回归方程为[WTBX]Y=16344X-10402，r=0.999 5。结果表明，绿原酸在8.01～64.08 μg/mL内有良好的线性关系。
2.5.5精密度试验
取绿原酸对照品溶液20 μL，重复进样6次。结果表明，其精密度良好，峰面积的RSD值为0.45%。
2.5.6稳定性试验
取供试品溶液（编号为Ⅷ），室温放置，于0，4，8，12，16，24 h依次进样。结果表明，供试品溶液稳定性良好，峰面积RSD值为1.38%。
2.5.7重复性试验
平行取编号为Ⅷ的药材粉末6份，每份约1 g，精密称定，按“2.5.3”项下方法进行处理，配制成供试品溶液，按建立的色谱条件分别进样。结果表明，该方法重复性良好，峰面积RSD值为1.21%。
2.5.8回收率试验
精密称取编号为Ⅷ的猪殃殃药材粉末9份，每份约0.5 g，精密称定，分为3组，分别加入低（质量分数为80%）、中（质量分数为100%）、高（质量分数为120%）3种不同浓度的绿原酸对照品溶液，混匀，进样，计算回收率，结果如表2所示，得到的RSD值为1.24%，回收率为97.71%～101.33%，符合要求。
3讨论
在《中华人民共和国药典》（1977年版）中猪殃殃药材的原植物记载为猪殃殃Galium aparine L，而在《上海市中药材标准》（1994年版）以及《江西省中药饮片炮制规范》（2008年版）中，原植物均记载为猪殃殃Galium aparine L. var. tenerum（Gren.et Godr.）Rchb.。参照《上海市中药材标准》（1994年版），将原植物拉丁名定为猪殃殃Galium aparine L.var.tenerum（Gren.et Godr.）Rchb.。

       　本文修订了药材的性状特征，结合对药材的实际观察，对《中华人民共和国药典》（1977年版）猪殃殃性状鉴别中叶片的刺状毛以及果实的颜色进行了修改：由原来的“边缘及下表面中脉有倒生小刺”修改为“两面常有刺状毛”；将原来的果实颜色“绿褐色”修改为“深褐色或绿褐色”，使性状描述更加准确。制定了检查项、浸出物、绿原酸含量的限度，利用各测定项限度，对药材内在质量进行更好的评价。 

　　薄层鉴别是中药材进行定性鉴别的重要方法之一。本文薄层鉴别中对提取的溶剂、方法以及提取液的纯化方法分别进行了考察，发现甲醇作为提取溶剂时，采用加热回流的方法能使药材的提取更加完全。通过比较，发现萃取方法能够有效除去低极性的杂质，利用所含成分的差异，对乙酸乙酯提取部位和正丁醇提取部位分别进行鉴别。通过2个薄层鉴别方法的建立，能够对药材进行更多层次和比较全面的质量控制。
参考菊花中绿原酸的含量测定方法[20]，对猪殃殃药材中的绿原酸进行含量测定，流动相曾采用不同比例的乙腈磷酸，结果发现以乙腈0.1%磷酸（二者体积比为13∶87）为流动相时，得到的绿原酸色谱峰的峰形与分离度较好，同时出峰时间亦较理想，故最终选其作为流动相。通过对提取溶剂、提取方法及提取时间的考察，确定提取溶剂采用体积分数为60%的甲醇，提取方法为超声波提取，超声时间为30 min。
本文所制定的猪殃殃药材的质量控制方法操作简便，重复性良好，能够为猪殃殃药材进行全面质量控制提供依据。
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