HPLC法测定知母总皂苷片的含量研究

初步药效学研究表明,知母总皂苷具有确切的防治缺血性脑卒中活性,将其制备成薄膜衣片剂具有良好的临床应用前景。为便于质量控制对其进行了HPLC法测定知母总皂苷片中的知母皂苷B-Ⅱ含量的研究。
　　1知母总皂苷片制备
　　1.1概述知母总皂苷是从知母中提取的总皂苷,初步药效学研究表明,本品具有确切的防治缺血性脑卒中活性。知母总皂苷为淡黄色粉末,无臭,味微苦,有一定吸湿性。片剂为常用口服剂型,且具有分剂量准确,稳定性好,易于工业化生产等优势,考虑到知母总皂苷具有一定的吸湿性,为增加片剂稳定性,故采用薄膜包衣技术将其制成薄膜包衣片。
　　1.2规格以及片重根据相关药效研究资料,推荐人每天服用剂量为知母总皂苷300 mg,为方便临床分剂量服用(每天服用3次,1片/次),确定本品的规格为每片含知母总皂苷100 mg,设计片重为300 mg。
　　1.3辅料选择[1]通常片剂制备中辅料的选用应遵循稳定、价廉的原则,针对知母总皂苷的理化性质,同时结合片剂生产工艺及工业化大生产的要求,筛选处方辅料。根据知母总皂苷具有良好的水溶性,粉末流动性较差等特点,为保证压片时有较好的流动性、较大的片剂硬度和较快的溶出速度,经过试验选用可压性好的微晶纤维素、预胶化淀粉和乳糖为稀释剂,为减少粘性,方便制软材,采用5%PVP无水乙醇溶液作粘合剂,预胶化淀粉兼作崩解剂,硬脂酸镁为润滑剂。采用湿法制粒法压片,平均裸片重约300 mg。考虑到知母总皂苷具有一定的吸湿性,为增加片剂稳定性,故采用薄膜包衣技术将其制成薄膜包衣片。
　　2仪器和试剂、试药
　　2.1主要仪器色谱仪:Waters高效液相色谱仪,510泵;检测器:SEDEX 75型蒸发光散射检测器(ELSD),迪马公司;工作站:SR2000(上海军锐科技有限公司);色谱柱:大连依利特hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm,10 μm);流动相:乙腈∶水(25∶75);流速为0.8 mL/min,载气压力3.5 bar,漂移管温度40 ℃,GAIN=7。
　　2.2试剂乙腈为色谱纯,水为重蒸水。
　　2.3对照品知母皂苷B-Ⅱ,来自陕西天森药物研究开发有限公司。
　　3方法与结果
　　3.1线性范围考察对照品储备液的制备:精密称取知母皂苷B-Ⅱ对照品100.12 mg置100 mL量瓶内,以流动相:乙腈∶水(25∶75)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液。
　　知母皂苷工作曲线的绘制:取知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液0.1、0.2、0.3、0.5、1.0 mL,置10 mL量瓶中,以流动相稀释至刻度,配制成浓度为10、20、30、50、100 μg/mL的溶液,作为知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液。分别取20 μL注入液相色谱仪,记录峰面积,并求对数,结果(图1)。
　　X为知母皂苷B-Ⅱ对照品的浓度,Y为峰面积。结果表明知母皂苷B-Ⅱ对照品在10 ～100 μg/mL范围内浓度与峰面积成良好的线性关系。
　　3.2重复性取浓度为300 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液,照上述色谱条件,连续进样5次,计算相对标准偏差,考查日内精密度,结果(表1)。
　　试验结果表明,知母皂苷B-Ⅱ3种不同浓度测定的回收率分别为96.3%、96.4%、96.1%,平均回收率为96.27%;日内和日间相对标准偏差分别为1.8%和0.75%。上述测定方法专属性强。
　　3.5含量测定方法
　　3.5.1色谱条件与系统适用性试验用碳十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈∶水(25∶75)为流动相;载气压力3.5 bar,漂移管温度40 ℃,GAIN=7。理论板数按知母皂苷B-Ⅱ峰计算,应不低于2 000。
　　3.5.2对照品溶液的制备精密称取知母皂苷B-Ⅱ对照品100.12 mg,置100 mL量瓶内,以流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液。精密量取知母皂苷B-Ⅱ对照品储备液3 mL,置10 mL量瓶中以流动相稀释至刻度,即为300 μg/mL的知母皂苷B-Ⅱ对照品溶液。
　　3.5.3测定法取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于知母总皂苷100 mg),置100 mL量瓶中,加流动相适量,震摇使溶解,加流动相至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液5 mL,置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。
　　分别取20 μL注入液相色谱仪,记录峰面积,计算结果。3批结果分别为60.9 mg、61.5 mg、61.2 mg,测定结果良好。
　　4结论
　　通过上述HPLC法测定本人制备的知母总皂苷片中知母皂苷B-Ⅱ含量的研究,证实方法专属性强、简便,可用于产品大生产的质量控制。
　　
　　参考文献:
　　[1]毕殿洲.药剂学[M].4版.北京:人民卫生出版社,1997:317-322.