铁皮石斛促生长内生真菌的筛选与鉴定(2)

【论文发表关健词】[关键词]铁皮石斛；内生真菌；促生长活性；侵染检测；菌种鉴定

【职称论文摘要】

3.2 内生真菌对铁皮石斛苗侵染的检测 内生真菌与铁皮石斛共培养后，石蜡切片分析8个促生长活性内生真菌和2个（19-R-18，38-R-18）有害真菌对铁皮石斛根的侵染情况。接菌铁皮石斛苗的根系都被真菌菌丝包被，根表无根

  

    在根被组织中，菌株22-R-4，G03-R-5形成了菌丝团，G08-R-17形成了菌丝圈，05-R-5，19-R-18，35-R-11，38-S-11，38-R-18，40-R-3以菌丝穿行于根被细胞之间，其中19-R-18和38-R-18能够形成细胞膨大的菌丝，而34-S-9则以分生孢子的形式存在。菌丝在进入根被细胞时，根被细胞并没有表现出任何防御的反应，见图2。
　　在外皮层，尤其是外皮层通道细胞中，真菌形态主要是菌丝和菌丝团。22-R-4，38-S-11，G08-R-17在外皮层通道细胞内围绕细胞核形成菌丝团结构。05-R-5，19-R-18，38-R-18是以菌丝的形式存在。34-S-9，35-R-11，40-R-3 和G03-R-5并没有侵染通道细胞。19-R-18的菌丝接近外皮层及侵染外皮层通道细胞时，外皮层细胞和通道细胞产生了细胞壁木质化加厚反应，来抵抗真菌的入侵。G03-R-5在外皮层外侧根被细胞定殖，外皮层细胞也发生了防御反应，见图2。
　　在皮层细胞中，菌株G08-R-17，22-R-4形成了菌丝团结构，菌株05-R-5的菌丝在皮层细胞中穿行，其他活性真菌接种的铁皮石斛苗根的皮层细胞中，没有观察到菌丝存在，皮层细胞没有表现出任何的不良反应，见表1，图2。而19-R-18在根被中定植时，皮层靠外侧的细胞产生了防御反应，其细胞壁木质化加厚。共生试验中，菌株38-R-18不利于植株生长，其菌丝可在皮层细胞中扩展，并进入木质部导管和韧皮部筛管中定植，这可能是对宿主造成伤害的原因，见图2。
　　3.3 促生长活性内生真菌的鉴定
　　3.3.1 产孢内生真菌的鉴定 根据产孢内生真菌的培养特性、显微形态特征，依据萨卡图（Saccardo）和休斯-塔巴基-巴伦（Hughes-Tabaki-Barron）真菌分类系统进行鉴定。
　　菌株34-S-9特征：在PDA或麦麸糖培养基上，菌落白色，气生菌丝较发达，黑色孢子堆分布其中，边缘整齐，背面淡黄色。菌丝无色，直径2.0～4.0 μm，有隔膜。分生孢子椭圆形至纺锤形，具4个横膈，两端细胞无色，锥形，中间细胞黑色，15.0～19.0×4.5～6.0 μm。据此特征鉴定为Pestalotiopsis sp.
　　菌株40-R-3特征：在PDA或麦麸糖培养基上，菌落棕色，气生菌丝不发达，贴培养基生长，边缘不整齐，背面棕色，培养基内有大量色素存在，呈棕色。菌丝棕色，有隔膜，菌丝表面不光滑，直径5.0～10.0 μm。分生孢子梗瓶梗状，多个聚生在一起，8.0～12.0×5.0～8.0 μm，多个分生孢子串生在分生孢子梗上。分生孢子棕色，单胞，双层壁，表面有纹饰，大小8.0～15.0×5.0～10.0 μm，孢子具有基细胞。据此特征鉴定为Eurotium repens de Bary。
　　3.3.2 不产孢内生真菌的鉴定 对各菌株及与其ITS序列相似性大于95%的已知真菌进行Blast分析，构建最大邻接树，获得与待测菌株聚在同一分支且相似性最大的已知真菌，见表3。根据相似性大于等于99%，可以鉴定到种，相似性在95%～99%，可以鉴定到属，而相似形小于95%，只能鉴定到科的序列相似性原则^[13]，菌株22-R-4，35-R-11分别与匹配序列属于同一个种，分别为Coprinellus angulatus和Pholiota multicingulata；菌株05-R-05，38-S-11虽然可以鉴定到种，但匹配菌株只鉴定到属，因而菌株05-R-05，38-S-11也只能鉴定到属，分别为Pyrenochaeta sp.，Alternaria sp.；菌株G03-R-5，G08-R-17分别与匹配序列属于同一个属，分别为Pyrenochaeta sp.，Helotiales sp.。